| １． |
授業の概要（ねらい） |
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以下の内容を学びます。
(1) DNAの連結と形質転換：プラスミドベクターの作製、lacZ DNAの連結、大腸菌の形質転換
(2) DNAの精製：プラスミドDNAの抽出と精製
(3) 制限地図の作成：制限酵素切断部位の同定、アガロースゲル電気泳動
(4) 試験管内でのDNA増幅：PCR法による lacZ DNAの増幅
(5) 遺伝子発現の調節：β-ガラクトシダーゼの誘導合成、呈色反応による酵素活性の測定
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| ２． |
授業の到達目標 |
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大腸菌プラスミドを用いたDNA組換え実験操作の基本技術を習得する。
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| ３． |
成績評価の方法および基準 |
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試験は行ないません。2/3以上出席し、レポートの結果が60％以上を合格とします。
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| ４． |
教科書・参考書 |
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あらかじめ、実験テキストを配付します。
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| ５． |
準備学修の内容 |
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事前に実験テキストをよく読んでおいて下さい。
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| ６． |
その他履修上の注意事項 |
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白衣、名札、A4判レポート用紙、定規を各自で用意して下さい。
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| ７． |
各回の授業内容 |
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| 【第１回】 |
組換え体プラスミドDNAの作製と形質転換
１．制限酵素によるプラスミドDNAの切断
２．LacZ DNAの連結
３．大腸菌の形質転換 |
| 【第２回】 |
| アガロースゲル電気泳動によるDNA切断反応の検証 |
| 【第３回】 |
| アルカリ法によるプラスミドDNAの抽出と精製 |
| 【第４回】 |
制限地図の作成
１．制限酵素によるプラスミドDNAの切断
２．アガロースゲル電気泳動による酵素切断部位の同定 |
| 【第５回】 |
ラクトースオペロンの発現調節1
IPTG による lacZ 遺伝子の発現誘導 |
| 【第６回】 |
ラクトースオペロンの発現調節2
呈色反応によるβ-ガラクトシダーゼ活性の測定 |
| 【第７回】 |
| PCR法による lacZ DNAの増幅、総合討論 |
| 【第８回】 |
| レポート作成 |
| 【第９回】 |
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| 【第10回】 |
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| 【第11回】 |
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| 【第12回】 |
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| 【第13回】 |
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| 【第14回】 |
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| 【第15回】 |
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